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CRISPR-Cas9常見問題解答(FAQ),助您輕松解決實驗困惑!

CRISPR-Cas9常見問題解答(FAQ),助您輕松解決實驗困惑!

CRISPR-Cas9作為目前最常使用的基因編輯系統,已廣泛應用于人類細胞、斑馬魚、小鼠以及細菌的基因組精確修飾。CRISPR-Cas9基因編輯技術在一系列基因治療的應用領域都展現出極大的應用前景,例如血液病、腫瘤和其他遺傳疾病。然而,在基因編輯實驗中我們卻經常會被一些問題所困擾,特別是對于新手小白來說。下面小編就以riboEDIT? CRISPR-Cas9為例,匯總了基因編輯實驗中常見的一些問題解答,希望可以對正在或即將要進行CRISPR-Cas9基因編輯實驗的各位小伙伴們有所幫助!   riboEDIT?...

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lncRNA新研究進展盤點(20210520)

lncRNA新研究進展盤點(20210520)

Nat Cell Biol丨LIMIT是一種癌癥免疫和免疫療法中具有免疫原性的lncRNA IF:20.040? 2021年5月6日   MHC-1(主要組織相容性復合物-I)將腫瘤抗原呈遞給CD8+ T細胞,并觸發抗腫瘤免疫。人類可能擁有30,000-60,000個長鏈非編碼RNAs(lncRNAs)。然而,對于lncRNAs是否影響腫瘤免疫仍然知之甚少。本研究在人類和小鼠中鑒定了一個lncRNA...

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基因編輯實驗壁壘多?不妨試試Cas9 RNP體系

基因編輯實驗壁壘多?不妨試試Cas9 RNP體系

CRISPR-Cas9是一種在gRNA或crRNA+tracrRNA存在的條件下通過Cas9蛋白實現對基因組定點編輯的技術,Cas9和gRNA或crRNA+tracrRNA可通過多種方式導入細胞,其在胞內的高效表達直接影響CRISPR-Cas9系統的編輯效率。通常情況下以慢病毒感染或質粒轉染等方式提供Cas9和gRNA。然而,這容易導致外源基因片段的不可控插入,并引起免疫反應,存在潛在的威脅,這在一定程度上限制了CRISPR-Cas9技術在機體的應用[1]。   近年發展起來的Cas9...

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基于Cas9 mRNA的全RNA體系,讓基因編輯更簡單!

基于Cas9 mRNA的全RNA體系,讓基因編輯更簡單!

mRNA可瞬時表達所需的蛋白質,并且沒有插入突變的風險,已經成為基因組編輯的強有力工具。相比于傳統方法(質粒和病毒載體),通過mRNA進行基因編輯可避免許多諸如核酸酶的持續表達、或由于質粒和病毒的整合而無意激活先前沉默的基因組位點的風險。 ? CRISPR/Cas9作為目前最常使用的基因編輯系統,在crRNA和tracrRNA復合物(guide RNA)指導下,可將mRNA瞬時表達的Cas9蛋白靶向目標位點以進行DNA切割。銳博生物科學家團隊基于豐富的合成經驗,自主開發了采用天然復合物系統的全RNA...

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miRNA新研究進展盤點(20210514)

miRNA新研究進展盤點(20210514)

Nature丨胚胎胚層特化的全局miRNA劑量控制 ? IF:42.778? 2021年5月5日 ? MicroRNAs(miRNAs)在胚胎發育過程中具有重要的功能,其失調會導致癌癥。在不同的組織和腫瘤中發現了全局miRNA豐度的變化,這意味著精確控制miRNA劑量是很重要的,但是這種控制的潛在機制仍然未知。蛋白質復合物微加工器(包含一個DROSHA和兩個DGCR8蛋白)對于miRNA生物發生至關重要。本研究確定了一種發育調控的miRNA劑量控制機制,涉及DGCR8的選擇性轉錄起始(ATI)。ATI發生在DGCR8...

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Nature子刊丨西安交大一附院侯鵬組揭示非編碼RNA SNORD50A/B促進p53野生型乳腺癌生長的作用機制

Nature子刊丨西安交大一附院侯鵬組揭示非編碼RNA SNORD50A/B促進p53野生型乳腺癌生長的作用機制

乳腺癌是全世界女性中最常見的惡性腫瘤,大約八分之一至十分之一的女性可能在其一生中患上乳腺癌。得益于早期發現和有效的系統性療法,北美和西歐國家的乳腺癌死亡率正在下降。但是,乳腺癌仍然是發展中國家癌癥相關死亡最常見原因之一。因此,更好地了解乳腺癌的發病機制將有助于更準確的預后預測以及進行更有效的治療。...

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Nature子刊丨高內涵RNAi篩選揭示lncRNAs在細胞分裂中的多種作用

Nature子刊丨高內涵RNAi篩選揭示lncRNAs在細胞分裂中的多種作用

基因組穩定性依賴于有絲分裂和胞質分裂的適當協調,其中動態微管捕獲并如實將染色體分離到子細胞。英國倫敦大學瑪麗皇后學院Lovorka Stojic研究組聯合劍橋大學Fanni Gergely及Duncan T. Odom研究組通過靶向2000多個人類lncRNAs的高內涵RNAi成像篩選,鑒定了許多參與細胞分裂關鍵步驟的lncRNAs,如染色體分離、有絲分裂持續時間和胞質分裂。并揭示了與基因組穩定性有關的幾種lncRNAs,以及控制微管行為并具有細胞分裂以外功能的lncRNA,相關研究成果已發表在Nature...

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Nature子刊丨lncRNA DRAIC是一種新型自噬調節因子

Nature子刊丨lncRNA DRAIC是一種新型自噬調節因子

自噬是發生在所有真核細胞中的一種保守的降解過程,其功能障礙與包括癌癥在內的多種疾病有關。盡管目前有大量的研究發現了包括蛋白質和miRNAs在內的自噬調控新分子,但對于長鏈非編碼RNAs(lncRNAs)在該調控過程中的功能卻知之甚少。 為了鑒定自噬過程中新的功能性lncRNAs,研究人員針對600多個lncRNAs轉錄本進行了高通量RNAi篩選,并監測其對MCF-7細胞自噬的影響。鑒定并揭示了lncRNA...

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