?
載體構(gòu)建即是構(gòu)建含外源DNA的質(zhì)粒，根據(jù)不同的載體骨架及實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，銳博生物可提供多種類型的高品質(zhì)載體構(gòu)建服務(wù)。主要包括：miRNA靶基因3’UTR報(bào)告基因載體、lncRNA/基因過表達(dá)載體、circRNA過表達(dá)載體、shRNA載體、miRNA Sensor報(bào)告基因載體、啟動(dòng)子報(bào)告基因載體、信號(hào)通路報(bào)告基因載體等
?
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交以上任一載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，僅剩最后5天，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
miRNA靶基因3’UTR報(bào)告基因載體
pmiR-RB-ReportTM載體圖譜
銳博生物可以根據(jù)客戶需求定制任何基因的3’UTR雙熒光素載體。2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，有需求的各位小伙伴趕緊入手吧?。?strong>*由于構(gòu)建難度和實(shí)驗(yàn)難度隨著基因3’UTR長度的增加而顯著升高，建議構(gòu)建長度不超過2.5kb）
?
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/mirna-3utr/
?
應(yīng)用案例：
Xie Y, et al.?The Journal of clinical investigation, 2021.
Zhou C, et al.?Molecular Therapy, 2021.
lncRNA/基因過表達(dá)載體
?
通過lncRNA/基因過表達(dá)載體進(jìn)行功能獲得性實(shí)驗(yàn)（gain-of-function）是研究基因功能的重要手段，與以RNAi為代表的功能缺失性實(shí)驗(yàn)（loss-of-function）相互補(bǔ)充以驗(yàn)證lncRNA/基因在相關(guān)細(xì)胞功能中的作用。銳博生物pEXP-RB-Mam系列過表達(dá)載體，在多克隆位點(diǎn)上游有CMV強(qiáng)啟動(dòng)子，可高效地表達(dá)插入到多克隆位點(diǎn)中的lncRNA/基因。
pEXP-RB-Mam系列載體圖譜
主要元件：
CMV promoter：CMV啟動(dòng)子,可啟動(dòng)插入至多克隆位點(diǎn)處的基因的轉(zhuǎn)錄；
AmpR：氨芐青霉素抗性基因，用于含質(zhì)粒宿主菌篩選；
NeoR：新霉素抗性基因，用于G418等抗生素篩選轉(zhuǎn)染成功的哺乳動(dòng)物細(xì)胞；
EGFP：增強(qiáng)型綠色熒光蛋白，可用熒光顯微鏡等熒光檢測系統(tǒng)或流式細(xì)胞儀等檢測轉(zhuǎn)染成功的哺乳動(dòng)物細(xì)胞；
RFP：紅色熒光蛋白，可用熒光顯微鏡等熒光檢測系統(tǒng)或流式細(xì)胞儀等檢測轉(zhuǎn)染成功的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/lncrna-expression-vector-construction/
應(yīng)用案例：
以GAPDH作為內(nèi)參，選用293T、A549、Hela細(xì)胞作為過表達(dá)對(duì)象，構(gòu)建好的lncRNA1、2、3過表達(dá)載體分別在這3種細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)，qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果如圖所示：
LncRNA1、2、3過表達(dá)載體分別在293T、A549 和Hela細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)的qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果圖
circRNA過表達(dá)載體
環(huán)狀RNA（circRNA）是一種閉環(huán)的單鏈RNA分子，在細(xì)胞中發(fā)揮著多種重要作用，如調(diào)控轉(zhuǎn)錄，或者以ceRNA的方式調(diào)控miRNA的活性等等。pCE-RB-Mam環(huán)狀RNA過表達(dá)載體，多克隆位點(diǎn)兩翼高效促進(jìn)RNA成環(huán)剪切的反向重復(fù)序列可使插入到多克隆位點(diǎn)中的序列轉(zhuǎn)錄后成環(huán)剪切，從而實(shí)現(xiàn)circRNA的過表達(dá)。
pCE-RB-Mam載體圖譜
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
?
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/circrna-carrier/
應(yīng)用案例：
將circEYA3過表達(dá)載體和對(duì)照載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后，采用qRT-PCR分析MiaPaCa-2細(xì)胞中circEYA3和EYA3 mRNA的水平。
結(jié)果顯示重組circEYA3質(zhì)粒成功穩(wěn)定過表達(dá)circEYA3，且EYA3 mRNA水平無明顯變化。
Rong Z, et al.?Molecular Cancer, 2021.
通過qRT-PCR檢測空載體和circ_0018414過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的A549和SPC-A1細(xì)胞中circ_0018414的表達(dá)。
結(jié)果顯示兩個(gè)細(xì)胞中的circ_0018414均穩(wěn)定過表達(dá)。
Yao Y, et al.?Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2021.
shRNA載體
Short hairpin RNA（shRNA）是化學(xué)合成siRNA之外的另一種RNAi實(shí)驗(yàn)方法常用工具。銳博生物shRNA載體骨架為pRNAT-U6.1/Neo，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，shRNA在U6啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)，并最終剪切形成siRNA duplex起作用。載體上另外GFP標(biāo)簽，可用于檢測確認(rèn)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染情況。
服務(wù)流程：
a. 客戶提供靶基因Gene ID或shRNA序列，并與銳博生物簽訂服務(wù)合同；
b. shRNA載體構(gòu)建周期約25個(gè)工作日；
c. 銳博生物提供shRNA質(zhì)粒載體10μg及實(shí)驗(yàn)報(bào)告書。
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/short-hairpin-rna/
應(yīng)用案例：
構(gòu)建CCL5特異性shRNA載體及shNT載體，然后轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)周細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照相比，shRNAs（shCCL5-1 or shCCL5-2）破壞了周細(xì)胞中CCL5的表達(dá)，并顯著降低了周細(xì)胞CM的保護(hù)作用。
Zhang X N, et al.?Cell Research, 2021.
將構(gòu)建的Fosl1特異性shRNA及其NC克隆到AAV9-shRNA表達(dá)質(zhì)粒以生成AAV9-shFosl1和AAV9-shNC，然后通過皮下注射到新生小鼠體內(nèi)。結(jié)果顯示，新生小鼠心臟中的Fosl1表達(dá)顯著降低，并且Fosl1沉默顯著抑制了CMs的細(xì)胞周期進(jìn)入。
Wu H Y, et al.?NPJ Regenerative Medicine, 2021.
miRNA Sensor報(bào)告基因載體
miRNA Sensor報(bào)告基因載體主要用于檢測細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)miRNA的活性變化，譬如內(nèi)源競爭性RNA（ceRNA）對(duì)miRNA活性的影響。
銳博生物miRNA Sensor報(bào)告基因載體以pmiR-RB-Report?載體骨架為基礎(chǔ)，將目標(biāo)miRNA的結(jié)合序列克隆至海腎螢光素酶基因（hRluc）下游，目標(biāo)miRNA可通過該結(jié)合序列調(diào)控海腎螢光素酶的表達(dá)，故可以海腎螢光素酶基因作為報(bào)告基因，以螢火蟲螢光素酶基因（hLuc）作為內(nèi)參基因，通過檢測海腎螢光素酶活性的相對(duì)變化情況來判斷細(xì)胞內(nèi)miRNA的活性變化，如可以調(diào)控miRNA的ceRNA高表達(dá)，則miRNA被ceRNA結(jié)合，活性下降，海腎螢光素酶的相對(duì)活性上升。
miRNA Sensor報(bào)告基因載體圖譜
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
?
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/mirna-sensor/
應(yīng)用案例：
啟動(dòng)子報(bào)告基因載體
轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合是基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要事件，啟動(dòng)子報(bào)告基因載體可用于檢測特定轉(zhuǎn)錄因子通過啟動(dòng)子上特定位點(diǎn)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的檢測。
銳博生物pPro-RB-Report載體通過在海腎螢光素酶基因上游多克隆位點(diǎn)插入目的基因的啟動(dòng)子，以海腎螢光素酶基因作為報(bào)告基因，以螢火蟲螢光素酶基因作為內(nèi)參基因，通過檢測海腎螢光素酶活性的相對(duì)變化情況來確定該段啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性以及轉(zhuǎn)錄因子通過該段啟動(dòng)子特定位點(diǎn)調(diào)控基因表達(dá)的活性。
pPro-RB-Report載體圖譜
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/ppro-rb-report/
信號(hào)通路報(bào)告基因載體
TGF-β(transforming growth factor beta，轉(zhuǎn)化生長因子β）在多種細(xì)胞中影響細(xì)胞的生長、分化、周期調(diào)控、免疫反應(yīng)等，從而與個(gè)體的發(fā)育、腫瘤、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等都有緊密的聯(lián)系。一般情況下，TGF-β與胞膜外側(cè)的受體結(jié)合后可誘導(dǎo)產(chǎn)生一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)放大從而磷酸化并激活SMAD2和SMAD3，磷酸化的SMAD2和SMAD3與SMAD4結(jié)合后一起被轉(zhuǎn)運(yùn)入核，該活化的SMAD復(fù)合物與DNA上的SBE（SMAD binding element）結(jié)合后可促進(jìn)相關(guān)下游基因的轉(zhuǎn)錄。
pREL-RB-TGF-β信號(hào)通路報(bào)告基因載體的hRluc（Renilla Luciferase）上游，由含有多個(gè)SBE及minP的序列組成，當(dāng)TGF-β/SMAD信號(hào)通路活化時(shí)，可促進(jìn)hRluc的表達(dá)。故通過檢測hRluc產(chǎn)生的螢光信號(hào)，即可反應(yīng)TGF-β/SMAD信號(hào)通路的活化情況。
pREL-RB-TGF-β信號(hào)通路報(bào)告基因載體圖譜
主要元件：
hRluc：海腎螢光素酶基因，為報(bào)告基因；
luciferase：螢火蟲螢光素酶基因，可作為參照基因；
multimerized SBE：多重SMAD結(jié)合元件，活化的SMAD結(jié)合位點(diǎn)；
pause site：轉(zhuǎn)錄中止信號(hào)，減少上游基因轉(zhuǎn)錄對(duì)hRluc轉(zhuǎn)錄的影響。
2021年10月31日前，凡是在銳博生物在線平臺(tái)（m.jyzfjx.com）提交載體構(gòu)建服務(wù)即可享受75折特惠促銷價(jià)，
有需求的各位小伙伴趕緊入手吧！
委托服務(wù)/下單鏈接：http://m.jyzfjx.com/product-and-service/carrier-construction/signaling-pathways/
客戶代表性文章
[1] Zhang X N, Yang K D, Chen C, et al. Pericytes augment glioblastoma cell resistance to temozolomide through CCL5-CCR5 paracrine signaling[J].?Cell Research, 2021: 1-16.
[2] Rong Z, Shi S, Tan Z, et al. Circular RNA CircEYA3 induces energy production to promote pancreatic ductal adenocarcinoma progression through the miR-1294/c-Myc axis[J].?Molecular Cancer, 2021, 20(1): 1-19.
[3] Wu H Y, Zhou Y M, Liao Z Q, et al. Fosl1 is vital to heart regeneration upon apex resection in adult Xenopus tropicalis[J].?NPJ Regenerative Medicine, 2021, 6(1): 1-16.
[4] Xie Y, Zhang X, Xu P, et al. Aberrant oligodendroglial LDL receptor orchestrates demyelination in chronic cerebral ischemia[J].?The Journal of clinical investigation, 2021, 131(1).
[5] Zhou C, Wei W, Ma J, et al. Cancer-secreted exosomal miR-1468-5p promotes tumor immune escape via the immunosuppressive reprogramming of lymphatic vessels[J].?Molecular Therapy, 2021, 29(4): 1512-1528.
[6] Yao Y, Zhou Y, Hua Q. circRNA hsa_circ_0018414 inhibits the progression of LUAD by sponging miR-6807-3p and upregulating DKK1[J].?Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2021, 23: 783-796.
[7] Zhou R, Shi L, Shan K, et al. Circular RNA-ZBTB44 regulates the development of choroidal neovascularization[J].?Theranostics, 2020, 10(7): 3293.
[8] Liu Y, Liu H, Li Y, et al. Circular RNA SAMD4A controls adipogenesis in obesity through the miR-138-5p/EZH2 axis[J].?Theranostics, 2020, 10(10): 4705.
[9] Lin J, Liu Z, Liao S, et al. Elevation of long non-coding RNA GAS5 and knockdown of microRNA-21 up-regulate RECK expression to enhance esophageal squamous cell carcinoma cell radio-sensitivity after radiotherapy[J].?Genomics, 2020, 112(3): 2173-2185.
[10] Li J, Li P, Zhang G, et al. CircRNA TADA2A relieves idiopathic pulmonary fibrosis by inhibiting proliferation and activation of fibroblasts[J].?Cell death & disease, 2020, 11(7): 1-15.
