嗎啡等阿片類藥物一直是治療嚴(yán)重和慢性疼痛的主要藥物。嗎啡長期使用會導(dǎo)致嗎啡耐受性迅速發(fā)作，這會降低鎮(zhèn)痛效果，需要更大的劑量才能達(dá)到等效的疼痛緩解效果。但嗎啡劑量增加伴隨著呼吸抑制、便秘等不良反應(yīng)的加重。盡管在治療阿片類藥物耐受性方面做了許多努力，但現(xiàn)有藥物仍然無法有效控制它。因此，迫切需要對嗎啡耐受機(jī)制進(jìn)行新的認(rèn)識，以確定有效的治療靶點(diǎn)。

長鏈非編碼RNAs（lncRNAs）是一種長度超過200個核苷酸的RNA轉(zhuǎn)錄本，沒有明顯的蛋白質(zhì)編碼能力。通常，lncRNAs通過與DNA、RNA和蛋白質(zhì)相互作用來抑制基因表達(dá)。lncRNAs在神經(jīng)系統(tǒng)中的病理作用已被廣泛研究，最近的發(fā)現(xiàn)揭示了一些lncRNAs的表達(dá)在嗎啡耐受過程中發(fā)生了改變。然而，lncRNAs與嗎啡耐受性之間的關(guān)聯(lián)仍然知之甚少。MRAK159688是一種來源于6號染色體的高度保守的lncRNA，可與Sin3a（SIN3轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白家族成員A）和CoREST（REST輔阻遏物）結(jié)合，這兩者都是REST（阻遏元件1沉默轉(zhuǎn)錄因子）復(fù)合物的關(guān)鍵元件，進(jìn)而調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)以響應(yīng)缺血性腦損傷。之前的研究發(fā)現(xiàn)MRAK159688在嗎啡耐受大鼠的脊髓中顯著上調(diào)。然而，MRAK159688在嗎啡耐受中的作用仍然未知，需要進(jìn)一步研究。

REST，也稱為NRSF（神經(jīng)元限制性沉默因子），是一種轉(zhuǎn)錄抑制劑，通過表觀遺傳重塑負(fù)調(diào)節(jié)靶mRNAs的表達(dá)。有充分證據(jù)表明REST是MOR（mu阿片受體）表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，REST誘導(dǎo)的MOR下調(diào)參與降低骨癌疼痛患者嗎啡的鎮(zhèn)痛效果。考慮到MOR在嗎啡鎮(zhèn)痛中的重要性，以及MRAK159688與REST相關(guān)蛋白之間的關(guān)聯(lián)，猜測MRAK159688可能是通過促進(jìn)REST介導(dǎo)的大鼠MOR抑制來促進(jìn)嗎啡耐受。

近日，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院鄒望遠(yuǎn)團(tuán)隊發(fā)表了題為LncRNA MRAK159688 facilitates morphine tolerance by promoting REST-mediated inhibition of mu opioid receptor in rats的研究論文。作者通過RACE證實(shí)了MRAK159688轉(zhuǎn)錄本的全長cDNA序列，并確定了MRAK159688通過直接促進(jìn)REST介導(dǎo)的對脊髓MOR的抑制來促進(jìn)嗎啡耐受的分子機(jī)制。暗示MRAK159688可能代表治療嗎啡耐受的一個有希望的靶點(diǎn)。

首先，研究人員通過鞘內(nèi)注射嗎啡連續(xù)7天后建立了大鼠嗎啡耐受模型，發(fā)現(xiàn)機(jī)械刺激縮足反應(yīng)閾值（PWMT）和熱刺激縮足反應(yīng)潛伏期（PWTL）在第8天顯著降低，表明慢性嗎啡暴露引起痛覺過敏。接著，研究人員通過RACE分析鑒定出MRAK159688是一個全長2140 bp的轉(zhuǎn)錄本。FISH結(jié)果顯示MRAK159688的熒光強(qiáng)度增加，并且使用qRT-PCR在嗎啡耐受大鼠的脊髓中檢測到MRAK159688熒光呈時間依賴性增加。表明慢性嗎啡處理顯著增加了MRAK159688的表達(dá)。

Fig1. lncRNA MRAK159688在嗎啡耐受誘導(dǎo)過程中上調(diào)

由于MRAK159688的表達(dá)在嗎啡作用下顯著上調(diào)，因此研究人員探索了MRAK159688過表達(dá)對嗎啡鎮(zhèn)痛功效的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MRAK159688降低了嗎啡的鎮(zhèn)痛效果并誘導(dǎo)疼痛行為。隨后，研究人員使用小干擾RNA（siRNA）下調(diào)MRAK159688以闡明MRAK159688在嗎啡耐受性發(fā)展中的作用及其在維持嗎啡耐受中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MRAK159688的下調(diào)可以減弱嗎啡耐受性的形成，部分逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受性的發(fā)展，并減輕嗎啡誘導(dǎo)的痛覺過敏。

Fig2. 下調(diào)MRAK159688部分逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受性的發(fā)展

機(jī)制研究顯示，MRAK159688位于神經(jīng)元的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，并與細(xì)胞核中的REST共定位。MRAK159688增強(qiáng)REST的表達(dá)和功能，從而抑制MOR的表達(dá)并隨后誘導(dǎo)嗎啡耐受。此外，REST過表達(dá)阻斷了MRAK159688 siRNA對緩解嗎啡耐受的作用。

Fig3.?長期應(yīng)用嗎啡可上調(diào)脊髓內(nèi)MRAK159688的表達(dá)，增加REST的表達(dá)，抑制MOR的表達(dá)誘導(dǎo)嗎啡耐受

總的來說，慢性嗎啡給藥介導(dǎo)的脊髓中MRAK159688的上調(diào)通過促進(jìn)REST介導(dǎo)的MOR抑制來促進(jìn)嗎啡耐受和痛覺過敏。MRAK159688下調(diào)可能代表一種新的基于RNA的嗎啡耐受治療方法。

原文鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0028390821004950?via%3Dihub

本研究使用到的動物用lncRNA siRNA及其NC產(chǎn)品由銳博生物提供！