銳博生物運用pmiR-RB-Report?報告基因檢測系統(tǒng)構(gòu)建您研究的 miRNA 靶基因3’UTR 區(qū)域，您只需將miRNA mimic 與構(gòu)建好的靶基因載體共轉(zhuǎn)，即可檢測miRNA 是否對靶基因有調(diào)控作用。pmiR-RB-Report?報告基因檢測系統(tǒng)專門用來檢測miRNA 與靶基因的結(jié)合活性，該報告系統(tǒng)包含T7 啟動子驅(qū)動的報告熒光（hRluc），其下游構(gòu)建了靶基因3’UTR 區(qū)域，通過對該熒光的檢測，即可驗證miRNA 對該靶標是否有調(diào)控作用；另有一校正熒光（hluc）用于監(jiān)測轉(zhuǎn)染效率，靶標表達效率，可作為穩(wěn)定內(nèi)參。
銳博生物可以根據(jù)客戶需要定制任何基因的3’UTR 雙熒光素載體。
pmiR-RB-ReportTM雙熒光素酶質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染進入細胞后，轉(zhuǎn)錄出 hRluc 與靶基因3’UTR 區(qū)域組合而成的特殊mRNA，如果miRNA mimic能夠與包含靶基因3’UTR 的mRNA 互補結(jié)合，則熒光素酶的表達活性也受到顯著影響，通過檢測熒光素酶的熒光強度可定量分析miRNA 對靶基因的mRNA 調(diào)控效果。
miRNA 靶基因驗證實驗通常需要設置預測靶點突變組，以確認miRNA靶點正確性。只有兩者結(jié)合，才能準確地驗證miRNA靶點信息。
項目案例
熒光素酶報告基因試驗數(shù)據(jù)顯示miR-7 inhibitor 處理后活性更高，miR-7 mimic 處理后活性下降。Yu Q, et al. J CrohnsColitis. 2016.
轉(zhuǎn)染miR-9 inhibitor 進SH-SY5Y 和SK-N-SH 細胞，增加了熒光素酶活性，而Mutant 3’?-UTR 沒有此效果。 Zhang H, et al. Mol Cancer Ther. 2012.
注意事項：
由于構(gòu)建難度和實驗難度隨著基因3’UTR 長度的增加而顯著升高，建議構(gòu)建長度不超過2.5kb。
