堅決捍衛商業秘密，維護生物醫藥行業創新生態
?銳博生物作為一家專注于基因沉默技術和核酸藥CRO/CDMO的高新技術企業，多年來投入大量資源，自主研發并積累了豐富的商業和技術秘密，其中包括具有極高商業價值的siRNA核酸序列。這些信息不僅是公司核心競爭力的體現，更是推動生物醫藥行業創新發展的關鍵要素。然而，2021年，公司前員工卜繼國的違法行為，卻給我司帶來了前所未有的挑戰。
?卜繼國在任職期間，利用職務之便，獲取了我司大量客戶信息和siRNA核酸序列等商業秘密，解密后儲存至其個人移動硬盤并帶離公司。并在離職后將這些信息用于其新入職的廣州派真生物技術有限公司（以下簡稱“派真生物”）。派真生物明知卜繼國的行為違法，卻仍利用這些信息向我司客戶發送產品推廣郵件，嚴重侵犯了我司的合法權益，給公司造成了巨大的經濟損失和商譽損害。
?面對如此嚴重的侵權行為，我司毅然決定拿起法律武器，捍衛自身合法權益。2022年，我司向廣州知識產權法院提起訴訟，請求法院判令派真生物和卜繼國停止侵權行為，刊登聲明消除影響，并要求二者連帶賠償經濟損失。
?在審理過程中，廣州知識產權法院深入剖析了本案的復雜案情和法律適用難點。法院經審理認為，涉案客戶信息系能夠反映客戶交易習慣的深度經營信息，涉案技術信息系自主設計并用于基因沉默技術及靶向藥物研發的siRNA核酸序列，我司對上述信息采取了簽訂保密協議及使用文檔加密系統等保密措施，卜繼國獲取的客戶名單及核酸序列信息與上述信息相同，在沒有相反證據的情況下，應認定上述信息分別屬于經營秘密、技術秘密。卜繼國違反保密義務，以盜竊手段非法獲取涉案經營秘密51802條、技術秘密2323條，并向他人披露、使用部分經營秘密，派真生物應知卜繼國存在侵害商業秘密違法行為，仍獲取并使用該商業秘密，均構成侵害商業秘密的不正當競爭行為。
?2023年，廣州知識產權法院作出一審判決，判令卜繼國和派真生物立即停止侵權行為，卜繼國賠償我司經濟損失200萬元、維權合理費用40萬元，派真生物分別在100萬元、20萬元范圍內承擔連帶責任。2024年11月11日，廣東省高級人民法院作出二審判決，駁回上訴，維持原判。
?這場艱難的維權之路，不僅為我司帶來了正義的勝利，更為整個生物醫藥行業的知識產權保護提供了寶貴的范例。本案的判決，充分體現了我國知識產權法律體系對商業秘密的嚴格保護，以及對故意侵權行為的嚴厲打擊力度。我司作為原告，始終堅信法律的公正與權威，通過不懈的努力，最終捍衛了自己的商業秘密和核心競爭力。
?商業秘密是企業的生命線，是推動創新發展的關鍵動力。希望通過本案的判決，能夠引起更多企業對知識產權保護的重視，共同營造一個公平競爭、尊重創新的市場環境。生物醫藥行業的發展離不開創新，而創新的基石就是知識產權保護。我們將繼續加強內部管理，完善保密措施，同時呼吁全社會共同抵制侵權行為，為生物醫藥行業的高質量發展保駕護航。
?該案明確指出，在商業秘密權利人提供了初步證據證明其對所主張的商業信息采取了保密措施，且合理表明商業秘密被侵犯時，應認定其已履行了舉證義務，舉證責任轉移至涉嫌侵權人。該案判決為類案審理提供了良好范例，也對故意實施侵害商業秘密行為的主體予以嚴厲打擊，有力護航生物醫藥行業健康發展。
本案的成功維權，不僅是我司的一次勝利，更是整個生物醫藥行業的一次勝利。它向所有侵權者發出了明確的警示：任何侵犯商業秘密的行為都將受到法律的嚴懲。同時，也為其他企業在面對侵權行為時提供了寶貴的經驗和信心。我司將以此為契機，繼續加大研發投入，推動技術創新，為生物醫藥行業的健康發展貢獻更多力量。
引用文章：
1、醫藥領域核酸序列信息商業秘密案
1月31日，廣州市黃埔區、廣州開發區召開高質量發展大會，通報表彰了100家技術含量高、成長速度快、發展潛力大的“雛鷹企業”，以鼓勵廣大企業聚焦主業、苦練內功、強化創新，讓創新源泉充分涌流，讓創造活力充分迸發，雄鷹展翅，成為掌握更多獨門絕技的“獨角獸”“單打冠軍”和“行業小巨人”！
銳博生物憑借開創性的技術平臺、強大的產品研發創新能力以及日益突出的品牌影響力和市場發展潛力，在幾萬家創新主體中脫穎而出，榮登廣州市黃埔區、廣州開發區、廣州高新區“雛鷹企業”榜單。
雛鷹企業是指具有較強的創新能力，技術新，模式新，未來具有較高發展潛力的企業。該類企業具備一定的創新能力，擁有自主知識產權，且企業擁有的自主知識產權對其主要產品（服務）在技術上發揮支持作用，在產品、服務、技術、業態、模式、組織等方面取得突破，得到市場認可，是優質高成長企業的基礎力量。
銳博生物自成立以來始終立足于基礎生命科學與醫學研究，以寡核苷酸和mRNA技術為核心，提供各種高品質的寡核苷酸和mRNA產品（包括但不限于ASO、siRNA、CpG、Aptamer、crRNA、tracrRNA和mRNA）、高端科研服務、核酸藥CRO/CDMO服務及cGMP生產、GMP級mRNA生產及CMC服務，致力于讓新一代核酸藥從概念走向商業化的國家火炬計劃重點高新技術企業，是中國核酸行業的領軍企業之一。
近年來，公司承擔并完成了國家高新技術研究發展計劃、國家863計劃、十二五“重大新藥創制”科技重大專項和省市科技攻關等重大科研項目，已申請專利71項，其中授權專利21項。榮獲“國家火炬計劃重點高新技術企業”、“國務院僑辦重點華僑華人創業團隊”、“廣東省高新技術企業”、“廣州省企業技術中心”、“廣東省引進創新科研團隊”、“廣東省高新技術產品”、“廣州開發區瞪羚企業”等榮譽稱號。獲批成立南方醫院轉化醫學產學研合作基地、廣州市博士后創新實踐基地、國家級博士后工作站。獲得了廣東省核酸藥物工程實驗室、廣東省核酸醫藥工程技術研究中心、NMPA頒發的寡核酸原料藥生產許可等資質。公司已通過ISO13485與ISO9001國際質量管理體系標準認證，管理與研發能力得到權威認可。
本次能夠入選廣州黃埔區、廣州開發區、廣州高新區“雛鷹企業”，既是區政府對公司研發創新能力的高度認可，也是對公司發展潛力的肯定。創新永不停……銳博生物始終秉承“以創新求發展，以品質鑄未來，以誠信待客戶”的發展理念，致力于提供高品質的核酸產品與服務，構建國際化的合作平臺與伙伴關系，培養杰出的智慧型創新人才，為不斷滿足未來生命科學與醫學研究及轉化的需求而貢獻力量。
MicrOFFTM?miRNA antagomir是經過特殊化學修飾的miRNA拮抗劑，可直接注射于動物體內，用于抑制內源性miRNA。與普通抑制劑相比，動物用miRNA antagomir具有更高的穩定性和抑制效果，更易通過細胞膜、細胞間隙而富集于靶細胞。在動物實驗中antagomir通常可以通過系統或局部注射等方法進行給藥。關于科研實驗中的給藥方式一般沒有固定的模式，給藥方式應該根據具體的實驗靈活設計，在實際實驗過程中不斷調整調整和優化。
小編之前已經給大家整理一些關于動物用antagomir產品的客戶應用案例，詳情請見：
動物用miRNA antagomir案例應用策略解析(20210630)丨含動物造模、實驗處理、給藥方式、給藥劑量……
【更新】動物用antagomir產品案例應用策略解析(20211026)丨含給藥方式、給藥劑量、動物造模、實驗處理……
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本期文章小編給大家帶來的是關于動物用miRNA antagomir給藥方式的客戶應用案例，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
銳博生物miRNA antagomir
中文名：miRNA拮抗劑
功能：抑制內源性的miRNA
純化方式：in vivo（又稱Standard in vivo）
穩定性：經特殊化學修飾，穩定性高
給藥方式：局部給藥(5-20 nmol)；系統給藥(50-200 nmol)
作用方式：單鏈RNA，通過與體內的成熟miRNA強競爭性結合，阻止miRNA與其靶基因mRNA的互補配對，抑制miRNA發揮作用
客戶應用案例1：
Nature Communications（IF17.694）丨Dual functions of microRNA-17 in maintaining cartilage homeostasis and protection against osteoarthritis
疾病模型：骨關節炎（用氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉10周齡雄性小鼠。為了誘發與機械不穩定性相關的OA，通過橫斷右膝關節內側半月板脛骨韌帶進行DMM手術。對照小鼠接受了膝關節假手術）
動物模型：DMM誘導的OA小鼠模型（隨機分為2組，antagomir-17組、antagomir-NC組）
給藥方式：膝關節注射
給藥劑量：3 nmol（8μL）
給藥頻率：術后1周開始，每周注射3次，共4周
關節注射antagomir-17顯著降低了miR-17的表達，加重了軟骨破壞并增加了OARSI評分
客戶應用案例2：
Translational Research（IF10.171）丨Epididymal white adipose tissue promotes angiotensin II-induced cardiac fibrosis in an exosome-dependent manner
疾病模型：心臟纖維化（選取6-8周齡雄性野生型C57BL/6小鼠作為實驗對象）
動物模型：野生型C57BL/6小鼠模型（分為2組，antagomir-NC組、antagomir-23a-3p組）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：100nmol
給藥頻率：Ang II輸注前1天注射antagomiR-23a-3p或等量的ant-NC，Ang II輸注時每周3次，連續4周
注射antagomiR-23a-3p挽救了Ang II誘導的心臟功能異常和膠原沉積
參考文獻：Su M, Li W, Yuan Y, et al. Epididymal white adipose tissue promotes angiotensin II-induced cardiac fibrosis in an exosome-dependent manner[J].?Translational Research, 2022.
客戶應用案例3：
Journal of Neuroinflammation（IF9.587）丨MicroRNA-22-3p ameliorates Alzheimer’s disease by targeting SOX9 through the NF-κB signaling pathway in the hippocampus
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疾病模型：阿爾茨海默病（選取9月齡雄性APP/PS1小鼠作為實驗對象）
動物模型：APP/PS1小鼠（AD模型）（分為miR-22-3p antagomir組、PBS組）
給藥方式：海馬區注射
給藥劑量：2ul（50uM）
給藥頻率：注射速度0.2μL/min，注射后留針2 min，保證藥物吸收后緩慢拔針
注射miR-22-3p antagomir可導致AD小鼠認知能力和Aβ沉積
參考文獻：Xia P, Chen J, Liu Y, et al. MicroRNA-22-3p ameliorates Alzheimer’s disease by targeting SOX9 through the NF-κB signaling pathway in the hippocampus[J].?Journal of Neuroinflammation, 2022, 19(1): 1-19.
客戶應用案例4：
Molecular Therapy-Nucleic Acids（IF10.183）丨Upregulation of miR-520c-3p via Hepatitis B Virus Drives Hepatocellular Migration and Invasion through the PTEN/AKT/NF-κB Signaling Pathway
動物模型：異種移植小鼠模型（分為miR-520c-3p antagomir組、NC組）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：10nM
給藥頻率：每周2次，連續2周
注射miR-520c-3p antagomir抑制HBX誘導的體內腫瘤進展
參考文獻：Liu Y, Wang J, Chen J, et al. Upregulation of miR-520c-3p via Hepatitis B Virus Drives Hepatocellular Migration and Invasion through the PTEN/AKT/NF-κB Signaling Pathway[J].?Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2022.
客戶應用案例5：
Journal of Allergy and Clinical Immunology（IF14.290）丨CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia
研究模型：哮喘（使用8 周齡雌性BALB/c小鼠構建卵清蛋白OVA誘導的哮喘小鼠模型。簡言之，即第0天和第14天，在所有小鼠的腹股溝、背部、頸部和足墊通過皮下注射20μg/只乳化在2mg氫氧化鋁佐劑中的OVA以進行致敏。從第22天到第28天，致敏小鼠用1% OVA或等體積的0.1 M PBS通過射流霧化器霧化30分鐘，每天一次，每次OVA霧化后2h，對小鼠進行MiR-452-5p antagomir處理）
動物模型：過敏原誘導的變應性氣道炎癥小鼠模型（分為2組，分別MiR-452-5p antagomir、antagomir NC）
給藥方式：氣管給藥
給藥劑量：3mg/ml（50ul/只）
給藥頻率：每天1次，共7天
注射MiR-452-5p antagomir顯著誘導炎癥細胞數量，并消除si-circZNF652對OVA處理小鼠炎癥細胞數量的消極作用
參考文獻：Wang X, Xu C, Cai Y, et al. CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia[J].?Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2022.
客戶應用案例6：
Cell Death & Disease（IF9.685）丨Exosomal miR-155-5p derived from glioma stem-like cells promotes mesenchymal transition via targeting ACOT12
研究模型：膠質瘤（裸鼠側皮下注射1×107 U87細胞。7d后，將移植裸鼠隨機分為兩組）
動物模型：腫瘤異種移植小鼠模型（分為2組，分別MiR-155-5p antagomir、antagomir NC）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：10nmol
給藥頻率：每3天一次，連續3周，共7次
注射MiR-155-5p antagomir可抑制小鼠體內膠質瘤進展
參考文獻：Bao Z, Zhang N, Niu W, et al. Exosomal miR-155-5p derived from glioma stem-like cells promotes mesenchymal transition via targeting ACOT12[J].?Cell death & disease, 2022, 13(8): 1-14.
客戶應用案例7：
Clinical and Translational Medicine（IF8.554）丨MiR-192-5p/RB1/NF-κBp65 signaling axis promotes IL-10 secretion during gastric cancer EMT to induce Treg cell differentiation in the tumour microenvironment
研究模型：胃癌（裸鼠右側皮下注射5×106 BGC-823細胞。12d后，將移植裸鼠隨機分為兩組）
動物模型：腫瘤異種移植小鼠模型（分為2組，分別miR-192-5p antagomir、antagomir NC）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：5nmol
給藥頻率：每3天一次，共4次
注射miR-192-5p antagomir顯著抑制了腫瘤的進展
參考文獻：Song J, Lin Z, Liu Q, et al. MiR‐192‐5p/RB1/NF‐κBp65 signaling axis promotes IL‐10 secretion during gastric cancer EMT to induce Treg cell differentiation in the tumour microenvironment[J].?Clinical and translational medicine, 2022, 12(8): e992.
更多動物用miRNA antagomir應用案例持續更新中，敬請期待……
盡管近幾十年來某些癌癥患者的生存時間已顯著延長，但胰腺導管腺癌（PDAC）的總體5年生存率幾乎保持不變。缺乏用于診斷早期PDAC的可靠檢測可能是這種疾病患者總體生存率較差的原因，因為當癌癥仍處于局部時，它們是沒有癥狀或者癥狀不明顯，通常在晚期才被診斷出來。因此，開發具有高特異性和靈敏度的早期PDAC診斷新方法至關重要。
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外泌體是直徑為50~150nm的細胞外膜囊泡。外泌體含有來自供體細胞的蛋白質、脂質和RNA，被認為是細胞間通訊的關鍵信使。最近的研究調查了來自血清或血漿的外泌體標志物在腫瘤篩查中的潛在用途。在PDAC中，外泌體標志物包括基于細胞外囊泡（EV）的蛋白質標志物，例如glypican-1（GPC1）和一個五蛋白質標記。此外，基于EV長鏈RNA分析，在血漿中開發了一種用于檢測PDAC的診斷標記，這表明外泌體中的長鏈非編碼RNAs（lncRNAs）可能是一種有前景的診斷生物標志物。
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LncRNAs包含一大類超過200個核苷酸的轉錄本，幾乎或沒有蛋白質編碼能力。它們被認為通過調節mRNA穩定性、翻譯、翻譯后修飾和轉錄在基因表達網絡中發揮重要調節作用。通過與miRNAs、mRNAs、DNAs或蛋白質相互作用，lncRNAs有助于癌癥中細胞穩態的各個方面，包括增殖、存活、遷移和基因組穩定性。此外，lncRNAs可以被癌細胞釋放的外泌體包裹并轉移到受體細胞以調節癌癥進展。盡管循環外泌體lncRNAs在檢測早期腫瘤和監測疾病進展方面已顯示出具有非侵入性的生物標志物的潛力，但目前尚未確定用于早期檢測PDAC的循環外泌體lncRNAs，其潛在機制仍有待闡明。
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近日，Journal of Hematology & Oncology（IF23.168）期刊發表了一篇題為The LINC00623/NAT10 signaling axis promotes pancreatic cancer progression by remodeling ac4C modification of mRNA的研究論文。報道了一個新鑒定的致癌lncRNA LINC00623，其在體內外均能促進PDAC細胞的致瘤性和遷移能力。揭示了LINC00623/NAT10信號軸通過重塑mRNA的ac4C修飾促進胰腺癌進展的分子機制，暗示其可作為PDAC的潛在生物標志物和治療靶點。
為了研究循環外泌體lncRNAs作為早期檢測PDAC的生物標志物的潛力，研究人員分離并鑒定了來自5名PDAC患者和5名健康個體的循環外泌體，并對提取的外泌體RNA進行了高通量測序。結果共鑒定出4801個lncRNAs，其中180個在PDAC患者的血清樣本中上調，148個下調。隨后，研究人員根據候選lncRNAs在PDAC腫瘤組織和細胞系中的表達情況，對其進行了篩選。發現兩個候選lncRNAs LINC00623和HOXA-AS2在7個PDAC細胞系中高表達，并在腫瘤組織中上調。
Fig1. 外泌體lncRNA測序鑒定可作為早期檢測PDAC生物標志物的候選lncRNAs
更大患者隊列的RT-qPCR分析顯示，PDAC患者的循環外泌體LINC00623水平明顯高于良性胰腺腫瘤患者或健康個體。然而，循環外泌體HOXA-AS2在胰腺疾病患者和PDAC患者之間的水平差異無統計學意義。因此，選擇LINC00623進行進一步研究。結果發現，外泌體LINC00623在PDAC隊列中表現出較高的曲線下面積（AUC），尤其是在CA19-9水平正常的患者中。LINC00623表達水平升高也與PDAC患者的臨床病理學特征和不良預后有關。
Fig2. 外泌體LINC00623在PDAC中上調，具有臨床意義
為了探索LINC00623在PDAC中的功能作用，研究人員構建了LINC00623缺失和過表達PDAC細胞系。結果發現，沉默LINC00623顯著抑制了細胞增殖、病灶形成、細胞運動性以及細胞遷移和侵襲。過表達LINC00623增強了PDAC細胞的致瘤和轉移能力，并導致了上皮標志物（E-cadherin）表達下調和間充質標志物（N-cadherin和Vimentin）表達上調。
Fig3. LINC00623增強了體外PDAC細胞的增殖、遷移和侵襲能力
為了檢測LINC00623在體內的致瘤能力，研究人員將LINC00623沉默的PDAC細胞和轉染載體的對照分別接種于BALB/c裸鼠的左右背側。結果發現，LINC00623沉默細胞形成的腫瘤比對照細胞形成的腫瘤小。此外，尾靜脈注射和脾臟注射體內轉移實驗顯示注射LINC00623沉默細胞的小鼠可分別在肺表面和肝臟中觀察到轉移性腫瘤結節。
Fig4. LINC00623增強了體內細胞的增殖、遷移和侵襲能力
接下來，研究人員進行了RNA pulldown、RNA免疫沉淀（RIP）和免疫共沉淀（Co-IP）實驗以及挽救實驗，以探索LINC00623在PDAC進展中的分子機制。結果表明，LINC00623與N-乙酰轉移酶10（NAT10）結合，并通過募集去泛素化酶USP39阻斷其泛素化依賴性降解。作為mRNA的N4-乙酰胞苷（ac4C）修飾的關鍵調節因子，NAT10被證明可以通過ac4C修飾來維持致癌mRNAs的穩定性并促進其翻譯效率。證實了LINC00623/NAT10信號軸通過重塑mRNA的ac4C修飾來促進胰腺癌的進展。
Fig5. LINC00623/NAT10軸對PDAC致瘤性和進展的影響示意圖
由于LINC00623在PDAC致瘤性中起著重要的作用，研究人員最后探索了LINC00623作為PDAC治療靶點的潛力。首先，研究人員采用LINC00623高表達的新鮮PDAC組織構建了患者源性異種移植（PDX）模型。隨后將LINC00623抑制劑（ASO-LINC00623）通過瘤內注射給藥于PDX模型。結果發現，ASO-LINC00623顯著降低了兩種PDX模型的腫瘤負荷。有趣的是，該治療對來自LINC00623表達較高的PDAC組織的腫瘤有更大的好處。此外，ASO-LINC00623顯著降低了LINC00623表達、細胞增殖和EMT，這可能與NAT10蛋白水平降低有關。
Fig6. LINC00623是PDAC潛在的治療靶點
總之，本研究將外泌體LINC00623鑒定為具有高特異性和靈敏度的早期PDAC診斷的有前途的生物標志物。LINC00623/NAT10信號軸促進PDAC細胞的增殖、致瘤、遷移和侵襲能力。機制上，NAT10通過重塑mRNA的ac4C修飾來增強PDAC中致癌mRNA的穩定性和翻譯。此外，靶向LINC00623的體內優化抑制劑具有作為PDAC治療候選藥物的潛力。
原文鏈接：https://jhoonline.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13045-022-01338-9#Sec25
本研究中使用到的外泌體提取試劑盒、外泌體lncRNA測序、FISH探針&試劑盒、
動物用ASO及NC產品均由銳博生物提供！
MARCKSL1-2通過募集SUZ12抑制HDAC1并提高miR-200b來逆轉肺腺癌細胞對多西他賽的耐藥性
發表期刊：Mol Cancer
影響因子：41.444
發表日期：2022年7月21日
方法和結果：本研究探討了LncRNA MARCKSL1-2（MARCKSL1-transcript variant 2, NR_052852.1）在LAD細胞DTX耐藥中的作用。結果發現，在DTX耐藥的LAD細胞中，MARCKSL1-2的表達顯著降低。通過功能獲得性或缺失性實驗、集落形成實驗、EdU檢測、TUNEL實驗和流式細胞術分析發現MARCKSL1-2抑制了親本和DTX耐藥LAD細胞的生長和DTX耐藥。此外，研究發現MARCKSL1-2通過增加miR-200b表達和抑制HDAC1在LAD中發揮作用。機制上，MARCKSL1-2將zeste 12（SUZ12）的抑制因子募集到組蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）的啟動子，以增強HDAC1啟動子的組蛋白H3賴氨酸27三甲基化（H3K27me3），從而降低HDAC1的表達。MARCKSL1-2通過阻斷HDAC1對miR-200b啟動子組蛋白乙酰化修飾的抑制作用上調miR-200b。此外，使用小鼠異種移植腫瘤模型的體內分析支持了MARCKSL1-2的過表達減弱了LAD腫瘤中的DTX耐藥。
結論：本研究證實了MARCKSL1-2通過募集SUZ12消除HDAC1對miR-200b的抑制作用，從而減輕了LAD細胞中的DTX耐藥。MARCKSL1-2可能是改善LAD化療的理想靶點。
Fig1.?MARCKSL1-2通過募集SUZ12抑制HDAC1并提高miR-200b來逆轉肺腺癌細胞對多西他賽耐藥的機制模型圖
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35864549/
心肌細胞特異性長鏈非編碼RNA調節心臟中Triadin基因的可變剪接
發表期刊：Circulation
影響因子：39.918
發表日期：2022年7月18日
背景：Ca2+穩態異常與心律失常和心力衰竭有關。Triadin在心肌細胞Ca2+穩態中起重要作用。單個triadin基因的可變剪接產生多個triadin亞型。小鼠MT-1或人類Trisk32是以心臟為主的亞型，由triadin外顯子1至8編碼。在人類中，導致心臟中Trisk32水平降低的triadin基因突變可導致心臟功能障礙和心律失常。心臟中Trisk32水平降低在心力衰竭患者中也很常見。然而，維持心臟中triadin異構體組成的機制仍然不清楚。
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結果：本研究報道了心肌細胞特異性lncRNA Trdn-as至少部分地通過調節triadin基因的可變剪接來維持心臟功能。在小鼠中敲除Trdn-as會下調心臟triadin、損害Ca2+處理并導致過早死亡。Trdn-as基因敲除小鼠在響應兒茶酚胺刺激時易發生心律失常。Trdn-as敲除心肌細胞中心臟triadin水平的正常化足以恢復Ca2+處理。最后，Trdn-as與心肌細胞核中的絲氨酸/精氨酸剪接因子共定位并相互作用，對于將剪接因子有效募集到triadin前體mRNA至關重要。
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結論：這些發現揭示了可變剪接的調節作為一種新的機制，長鏈非編碼RNA通過這種機制控制心臟功能。這項研究表明通過靶向長鏈非編碼RNA或調節可變剪接的途徑，有可能用于心臟病的潛在治療。
Fig2.?Trdn-as調節心臟中triadin異構體組成的模型
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35862102/
lncRNA微調水楊酸生物合成以平衡植物免疫和生長
發表期刊：Cell Host Microbe
影響因子：31.316
發表日期：2022年7月30日
植物免疫的組成性激活不利于植物的生長發育。本研究揭示了長鏈非編碼RNA（lncRNA）在微調植物免疫和生長平衡中的作用。研究人員發現一種稱為水楊酸生物發生控制器1（SABC1）的lncRNA，其可抑制免疫并促進健康植物的生長。SABC1將多梳抑制復合物2募集到其鄰近基因NAC3（編碼NAC轉錄因子）中，以通過H3K27me3減少NAC3的轉錄。NAC3激活ICS1（異分支酸合酶1）的轉錄，ICS1是催化水楊酸（SA）生物合成的關鍵酶。因此，SABC1通過減少NAC3和ICS1的轉錄來抑制SA的產生和植物免疫。在病原體感染后，SABC1被下調以抑制植物對細菌和病毒的抵抗力。總之，本研究結果揭示了lncRNA SABC1作為通過調節SA生物合成來平衡植物防御和生長的分子開關。
Fig3. lncRNA SABC1調節植物免疫和生長平衡的工作模型
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35908550/
METTL3誘導的mmu-LncRNA 121686/has-lncRNA 520657通過靶向miR-328-5p/HtrA3信號軸驅動AKI的進展
發表期刊：Mol Ther
影響因子：12.910
發表日期：2022年7月21日
急性腎損傷（AKI）的發病機制仍不完全清楚，缺乏有效的干預措施。本研究探討了METTL3是否通過調節細胞死亡參與AKI的進展。報道了PT-METTL3-KO通過抑制腎細胞凋亡顯著抑制缺血誘導的AKI。此外，本研究還發現在抗霉素處理的BUPMT細胞和小鼠缺血再灌注（I/R）誘導的AKI模型中mmu-lncRNA 121686的表達上調。功能上，mmu-lncRNA 121686可以促進I/R誘導的小鼠腎細胞凋亡。機制上講，mmu-lncRNA121686作為競爭性內源性RNA（ceRNA）可防止microRNA miR-328-5p介導的Htra3（高溫需求因子A3）的下調。PT-mmu-lncRNA 121686-KO小鼠通過miR-328-5p/HtrA3軸顯著改善缺血誘導的AKI。此外，與lncRNA 121686同源的hsa-lncRNA 520657可作為miR-328-5p海綿并上調Htra3以促進I/R誘導的人腎細胞凋亡。有趣的是，研究發現mmu-LncRNA 121686/hsa-lncRNA 520657上調依賴于m6A修飾后的METTL3。通過METTL3過表達可體外誘導Mmu-LncRNA 121686/miR-328-5p或hsa-lncRNA 520657/miR-328-5p/HtrA3軸；相反，這種效應被METTL3 siRNA減弱了。此外，本研究發現PT-METTL3-KO或METTL3 siRNA通過下調mmu-lncRNA 121686/miR-328-5p/HtrA3軸顯著抑制缺血、膿毒癥和萬古霉素誘導的AKI。總之，本研究數據表明METTL3/mmu-LncRNA121686/hsa-lncRNA 520657/miR-328-5p/HtrA3軸可能作為AKI的治療靶點。
Fig4. 作用模型示意圖
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35869629/
N6-甲基腺苷修飾的lncRNA LINREP通過募集PTBP1/HuR復合物促進膠質母細胞瘤進展
發表期刊：Cell Death Differ
影響因子：12.067
發表日期：2022年7月23日
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多形性成膠質母細胞瘤（GBM）被公認為成人中最具侵襲性的原發性腦腫瘤。它的典型特征是高異質性，這與廣泛的基因突變和復雜的可變剪接（AS）譜相對應。多嘧啶束結合蛋白1（PTBP1）被稱為AS中的主要抑制性剪接因子，參與了GBM中多個前體mRNA（pre-mRNA）的外顯子跳躍事件。然而，調節PTBP1表達和活性的精確機制仍有待闡明。本研究為基因間長鏈非編碼RNA（LINREP）在PTBP1誘導的AS調節中的作用提供了證據。LINREP與PTBP1和人類抗原R（HuR, ELAVL1）蛋白復合物相互作用并保護PTBP1免受泛素-蛋白酶體降解。因此，通過外顯子跳躍產生廣譜PTBP1誘導的剪接變體，特別是對于網狀內皮素4（RTN4）外顯子3的跳躍。有趣的是，LINREP還促進了核UPF1從PTBP1的解離，這增加了PTBP1與RTN4轉錄本的結合，從而在一定程度上增強了RTN4外顯子3的跳躍。此外，通過依賴于N6-甲基腺苷（m6A）形成和鑒定的方式，HuR的募集對于穩定LINREP至關重要。總之，本研究結果證明了LINREP在人類GBM中對PTBP1誘導的AS及其m6A修飾方式的雙重調節的功能意義，暗示HuR/LINREP/PTBP1軸可能作為GBM的潛在治療靶點。
Fig5. LINREP在GBM發展中的機制示意圖
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35871232/
MicrONTM miRNA agomir是經過特殊化學修飾的miRNA激動劑，可直接注射于動物體內，用于模仿內源性miRNA。相比細胞用miRNA mimic，動物用miRNA agomir具有更高的穩定性和miRNA活性，更易通過細胞膜、細胞間隙而富集于靶細胞。在動物實驗中agomir通常可以通過系統或局部注射等方法進行給藥。關于科研實驗中的給藥方式一般沒有固定的模式，給藥方式應該根據具體的實驗靈活設計，在實際實驗過程中不斷調整調整和優化。
小編之前已經給大家整理一些關于動物用agomir產品的客戶應用案例，詳情請見：
1、動物用agomir產品案例應用策略解析(20210623)丨含動物造模、實驗處理、給藥方式、給藥劑量……
2、【更新】動物用agomir產品案例應用策略解析(20211025)丨含給藥方式、給藥劑量、動物造模、實驗處理……
本期文章小編給大家帶來的是關于動物用miRNA agomir給藥方式的客戶應用案例，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
銳博生物miRNA agomir
中文名：miRNA激動劑
功能：模仿內源性的miRNA
純化方式：in vivo（Standard in vivo）
穩定性：經特殊化學修飾，穩定性高
給藥方式：局部給藥(1-10 nmol)；系統給藥(5-20 nmol)
作用方式：雙鏈RNA，作用鏈為正義鏈，通過模擬miRNA進入miRISC復合物來調節靶mRNA的表達而發揮作用
應用案例1：
Nature Communications（IF17.694）丨MicroRNA-21 promotes pancreatic β cell function through modulating glucose uptake
疾病模型：糖尿病（6周齡雄性2型糖尿病db/db小鼠）
動物模型：2型糖尿病db/db小鼠模型（分為2組，miR-21 agomir組、NC agomir組）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：15nmol
給藥頻率：第0、3、6、9天注射，共4次
Fig1. 將miR-21 agomir遞送至2型糖尿病db/db小鼠的胰腺可降低血糖水平
參考文獻：Liu R, Liu C, He X, et al. MicroRNA-21 promotes pancreatic β cell function through modulating glucose uptake[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 1-15.
應用案例2：
Nature Communications（IF17.694）丨Dual functions of microRNA-17 in maintaining cartilage homeostasis and protection against osteoarthritis
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疾病模型：骨關節炎（用氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉10周齡雄性小鼠。為了誘發與機械不穩定性相關的OA，通過橫斷右膝關節內側半月板脛骨韌帶進行DMM手術。對照小鼠接受了膝關節假手術）
動物模型：DMM誘導的OA小鼠模型（隨機分為4組，agomir-17組、agomir-NC組）
給藥方式：膝關節注射
給藥劑量：1.5 nmol（8μL）
給藥頻率：術后4周開始，每周注射4次，共4周
Fig2. 關節注射agomir-17顯著增加了miR-17的表達以及miR-17陽性細胞的數量，同時改善了OARSI評分
參考文獻：Zhang Y, Li S, Jin P, et al. Dual functions of microRNA-17 in maintaining cartilage homeostasis and protection against osteoarthritis[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 1-14.
應用案例3：
Bioactive Materials（IF16.874）丨Human bone marrow mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles inhibit shoulder stiffness via let-7a/Tgfbr1 axis
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疾病模型：肩部僵硬（選取約12周齡雄性C57/6J小鼠，并通過在左肩進行固定術，將小鼠的肩胛骨通過編織聚酯縫合線牢固地綁在肱骨遠端三分之一處，以建立SS模型。假手術為NC組，固定術實驗組為SS組）
動物模型：肩部僵硬（SS）小鼠模型（分為2組，agomir-let-7a-5p組、agomir-NC組）
給藥方式：關節內注射
給藥劑量：10nmol（10ul）
給藥頻率：固定后第4周開始，每周一次，共三周
Fig3. 注射agomir-let-7a-5p導致SS組肩關節囊的厚度明顯降低，以及Col 1和α-SMA的表達顯著減少
參考文獻：Luo Z, Sun Y, Qi B, et al. Human bone marrow mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles inhibit shoulder stiffness via let-7a/Tgfbr1 axis[J]. Bioactive materials, 2022, 17: 344-359.
應用案例4：
Biological Psychiatry（IF12.810）丨miR143-3p-Mediated NRG-1-Dependent Mitochondrial Dysfunction Contributes to Olanzapine Resistance in Refractory Schizophrenia
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疾病模型：難治性精神分裂癥（通過CRISPR-Cas9技術產生NRG-1 KO小鼠）
動物模型：NRG-1敲除小鼠模型（分為5組，WT組、NRG-1 KO組、agomir NC組、NRG-1 KO+奧氮平組、NRG-1 KO+奧氮平+miR143-3p agomir組）
給藥方式：腦內注射
給藥劑量：2ul（2.5 nM/ul）
給藥頻率：20分鐘內注射miR143-3p agomir，并在輸注完成后保持原位5分鐘
Fig4. 注射miR143-3p Agomir可挽救NRG-1 KO小鼠的奧氮平耐藥性
參考文獻：Sun J, Zhang X, Cong Q, et al. miR143-3p–Mediated NRG-1–Dependent Mitochondrial Dysfunction Contributes to Olanzapine Resistance in Refractory Schizophrenia[J]. Biological Psychiatry, 2022.
應用案例5：
Translational Research（IF10.171）丨Epididymal white adipose tissue promotes angiotensin II-induced cardiac fibrosis in an exosome-dependent manner
疾病模型：心臟纖維化（選取6-8周齡雄性野生型C57BL/6小鼠作為實驗對象）
動物模型：野生型C57BL/6小鼠模型（分為2組，agomir-NC組、agomir-23a-3p組）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：10nmol
給藥頻率：每周注射3次，連續4周
Fig5. 注射agomiR-23a-3p的小鼠表現出心臟功能惡化，膠原蛋白顯著沉積
參考文獻：Su M, Li W, Yuan Y, et al. Epididymal white adipose tissue promotes angiotensin II-induced cardiac fibrosis in an exosome-dependent manner[J]. Translational Research, 2022.
應用案例6：
Journal of Neuroinflammation（IF9.587）丨MicroRNA-22-3p ameliorates Alzheimer’s disease by targeting SOX9 through the NF-κB signaling pathway in the hippocampus
疾病模型：阿爾茨海默病（選取9月齡雄性APP/PS1小鼠作為實驗對象）
動物模型：APP/PS1小鼠（AD模型）（分為miR-22-3p agomir組、PBS組）
給藥方式：海馬區注射
給藥劑量：2ul（50uM）
給藥頻率：注射速度0.2μL/min，注射后留針2 min，保證藥物吸收后緩慢拔針
Fig6. 注射miR-22-3p agomir可改善AD小鼠認知能力和Aβ沉積
參考文獻：Xia P, Chen J, Liu Y, et al. MicroRNA-22-3p ameliorates Alzheimer’s disease by targeting SOX9 through the NF-κB signaling pathway in the hippocampus[J]. Journal of Neuroinflammation, 2022, 19(1): 1-19.
更多動物用miRNA agomir應用案例持續更新中，敬請期待……
LncRNA CTBP1-DT-encoded microprotein DDUP sustains DNA damage response signalling to trigger dual DNA repair mechanisms
LncRNA CTBP1-DT編碼的蛋白DDUP維持DNA損傷響應信號以觸發雙重DNA修復機制
發表期刊：Nucleic Acids Res
影響因子：19.160
發表時間：2022年7月18日
通過在受損部位保留DDR因子來維持DNA損傷響應（DDR）信號對于傳輸損傷感應和修復信號非常重要。本研究發現 DNA 損傷引發了lncRNA CTBP1-DT中核糖體與IRES區域的關聯，克服了上游開放閱讀框（uORF）的負面影響，并通過一種帽非依賴性的翻譯機制誘導了微蛋白DDUP（DNA損傷上調蛋白）的翻譯。激活的ATR激酶介導的DDUP磷酸化誘導了劇烈的“dense-to-loose”的構象變化，從而在受損部位維持了RAD18/RAD51C和RAD18/PCNA復合物，并啟動了RAD51C介導的同源重組和PCNA介導的復制后修復機制。重要的是，用ATR抑制劑治療消除了DDUP對RAD51C和PCNA染色質保留的影響，從而導致癌細胞對DNA損傷化療藥物過敏。總之，本研究結果揭示了DDR維持的一個合理機制，并可能代表一種有吸引力的治療策略，以改善基于DNA損傷的抗癌療法。
Fig1. lncRNA編碼的DDUP通過調控PCNA單泛素化和RAD18在DNA損傷位點的保留來協調DNA損傷修復的模型示意圖
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35849344/
The HHIP-AS1 lncRNA promotes tumorigenicity through stabilization of dynein complex 1 in human SHH-driven tumors
HHIP-AS1 lncRNA通過穩定人SHH驅動腫瘤中的動力蛋白復合物1來促進致瘤性
發表期刊：Nat Commun
影響因子：17.694
發表時間：2022年7月13日
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大多數lncRNAs顯示出物種特異性的表達模式，這表明癌癥的動物模型可能只是不完全地再現了人類lncRNAs與致癌通路之間的調控相互作用。在這些通路中，Sonic Hedgehog（SHH）信號在幾種人類癌癥實體中被異常激活。本研究揭示了靈長類動物特異性lncRNA HHIP-AS1（HedgeHog相互作用蛋白-反義1）的異常表達是SHH驅動腫瘤（包括髓母細胞瘤和橫紋肌樣瘤）的一個標志。HHIP-AS1是由與SHH調節因子HHIP共享的雙向啟動子主動轉錄的。體內外敲低HHIP-AS1可誘導有絲分裂紡錘體失調，從而損害致瘤性。機制上，HHIP-AS1直接與DYNC1I2（胞漿動力蛋白1中間鏈2）mRNA結合，并通過hsa-miR-425-5p減弱其降解。研究人員發現HHIP-AS1和DYNC1I2中的相應調節元件在小鼠中都不是進化保守的。總之，本研究發現了一種lncRNA介導的機制，該機制能夠在人類腫瘤中實現SHH通路激活發揮促有絲分裂作用。
Fig2. HHIP-AS1缺失可延長SHH驅動的體內腦腫瘤模型的生存期
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35831316/
PDIA3P1 promotes Temozolomide resistance in glioblastoma by inhibiting C/EBPβ degradation to facilitate proneural-to-mesenchymal transition
PDIA3P1通過抑制C/EBPβ降解來促進原神經-間質轉化，從而促進膠質母細胞瘤對替莫唑胺的耐藥性
發表期刊：J Exp Clin Cancer Res
影響因子：12.658
發表時間：2022年7月15日
背景：對替莫唑胺（TMZ）的耐藥性是預防膠質母細胞瘤（GBM）術后復發的主要障礙。盡管長鏈非編碼RNAs（lncRNAs）在GBM中發揮多種作用，但調節TMZ耐藥的lncRNAs尚未明確闡明。本研究旨在鑒定可能影響TMZ治療敏感性的lncRNAs，并探索新的治療策略來克服GBM中TMZ耐藥性。
結果：本研究鑒定了一個lncRNA PDIA3P1，其在TMZ耐藥的GBM細胞系中表達上調。過表達PDIA3P1促進了TMZ耐藥的獲得，而敲低PDIA3P1恢復了TMZ敏感性。PDIA3P1在MES-GBM中上調，促進GSCs中的PMT進展，并導致GBMs對TMZ治療更具耐藥性。機制上，PDIA3P1破壞了C/EBPβ-MDM2復合物并通過阻止MDM2介導的泛素化來穩定C/EBPβ蛋白。PDIA3P1的表達以時間和濃度依賴性的方式上調以響應TMZ處理，而TMZ誘導的PDIA3P1上調是通過p38α-MAPK信號通路介導的。NEF是一種特異性靶向具有出色血腦屏障（BBB）滲透性的p38α的小分子藥物。當與特定濃度的TMZ合用時，NEF阻斷了TMZ響應的PDIA3P1上調并產生協同效應。TMZ和NEF的組合在體外和體內均表現出優異的協同抗腫瘤作用。
結論：PDIA3P1通過穩定C/EBPβ促進PMT，降低GBM細胞對TMZ治療的敏感性。NEF抑制TMZ響應的PDIA3P1上調，NEF與TMZ聯合可提供更好的抗腫瘤作用。
Fig3. 工作模型圖顯示PDIA3P1在促進GBM細胞TMZ抗性中起關鍵作用
原文鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35836243/
Long non-coding RNA EVADR induced by Fusobacterium nucleatum infection promotes colorectal cancer metastasis
具核梭桿菌（F. nucleatum）感染誘導的lncRNA EVADR促進結直腸癌轉移
發表期刊：Cell Reports
影響因子：9.995
發表時間：2022年7月19日
具核梭桿菌（F. nucleatum）和長鏈非編碼RNA（lncRNA）EVADR均與結直腸癌（CRC）相關，但它們與結直腸癌轉移的關系以及EVADR促進結直腸癌轉移的機制尚不清楚。本研究報道了F. nucleatum促進結直腸癌細胞向肝臟和肺轉移，并且可以在小鼠模型的CRC轉移定植中檢測到。此外，F. nucleatum上調EVADR的表達，這可以增加CRC細胞在體內和體外的轉移能力。機制上，EVADR升高可作為Y-box結合蛋白1（YBX1）的模塊化支架，直接增強上皮-間質轉化（EMT）相關因子（如Snail、Slug和Zeb1）的翻譯。這些發現表明，由F. nucleatum誘導的EVADR通過YBX1依賴性翻譯促進結直腸癌轉移。EVADR-YBX1軸可能有助于預防和治療具有F. nucleatum相關CRC轉移的患者。
Fig4. F. nucleatum通過lncRNA EVADR-YBX1軸促進CRC轉移的機制模型
原文鏈接：https://www.cell.com/cell-reports/fulltext/S2211-1247(22)00933-0
Modular scaffolding by lncRNA HOXA10-AS promotes oral cancer progression
lncRNA HOXA10-AS的模塊化支架促進口腔癌進展
發表期刊：Cell Death Dis
影響因子：9.685
發表時間：2022年7月20日
最近的研究表明，長鏈非編碼RNAs（lncRNAs）是多種生物過程的關鍵基因調節因子，盡管它們缺乏蛋白質編碼能力。越來越多的證據表明，lncRNAs在介導細胞信號通路，尤其是與腫瘤發生相關的信號通路方面具有重要意義。因此，lncRNAs已成為癌癥發展和惡性腫瘤的新型功能調節因子和指標。最近的轉錄組學分析已經鑒定出一種腫瘤偏向表達的lncRNA，即HOXA10-AS轉錄本，其表達與患者生存相關。基于功能細胞的分析表明，HOXA10-AS轉錄本在調節口腔癌生長和轉移中是必不可少的。LncRNA表達也與藥物敏感性有關。本研究鑒定了HOXA10-AS作為TP63 mRNA加工的模塊化支架，并參與調節癌癥的生長。這些發現為lncRNA介導的分子調控提供了功能解釋，突出了lncRNA轉錄組在癌癥生物學中的重要性。
Fig5. HOXA10-AS 轉錄本作為TP63 RNA加工的模塊化支架
原文鏈接：https://www.nature.com/articles/s41419-022-05071-6